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產(chǎn)品名稱：己糖激酶(HK)活性檢測(cè)試劑盒  微量法

產(chǎn)品英文名：Micro Hexokinase(HK) Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC0745             產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣           產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：1270
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：己糖激酶試劑盒|活性檢測(cè)試劑盒|己糖激酶活性檢測(cè)|試劑盒|微量法

簡(jiǎn)要介紹：
HK廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是葡萄糖分解過(guò)程中的第一個(gè)關(guān)鍵酶，催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點(diǎn)。
 HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH ，NADPH 在340nm有特征吸收峰。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體20mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存；
產(chǎn)品說(shuō)明：
HK廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是葡萄糖分解過(guò)程中的第一個(gè)關(guān)鍵酶，催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點(diǎn)。
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH ，NADPH 在340nm有特征吸收峰。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV板）、研缽、冰。
操作步驟：
一、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：   

1. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500-1000:1 的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1:5-10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3. 血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

二、測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 樣本測(cè)定

（1）在試劑二中加入18mL 試劑一充分溶解，置于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴5min；用不完的試劑4℃保存一周；
（2）在試劑三中加入1mL 試劑一，充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存一周；
（3）在微量石英比色皿或96 孔板中加入180μL 試劑二、10μL 試劑三和10μL 樣本，混勻，立即記錄340nm 處20s 時(shí)的吸光值A1，比色后迅速將比色皿或酶標(biāo)板連同反應(yīng)液一起放入37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴或恒溫箱中，準(zhǔn)確反應(yīng)5分鐘；迅速取出比色皿并擦干，340 nm下比色，記錄5分20秒時(shí)的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
注意事項(xiàng)： 
1、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
2、*兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3、不同勻漿組織中HK 活力不一樣，做正式試驗(yàn)之前請(qǐng)做1-2 只預(yù)試，若ΔA>0.5，則說(shuō)明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當(dāng)濃度勻漿上清液（計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)），或縮短反應(yīng)時(shí)間至2min,使ΔA<0.5，以提高檢測(cè)靈敏度。
HK活性計(jì)算：   
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1. 血清（漿）HK 活性

單位的定義：每毫升血清（漿）在每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
HK（U/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=643×ΔA

2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中HK 活性

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
HK（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

2. 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g 組織每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
HK（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=643×ΔA÷W

3. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
HK（U/104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=1.286×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10^-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；
V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。
b.用96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1. 血清（漿）HK 活性

單位的定義：每毫升血清（漿）在每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
HK（U/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=1071.7×ΔA

2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中HK 活性

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
HK（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1071.7×ΔA÷Cpr

2. 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g 組織每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
HK（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=1071.7×ΔA÷W

3. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
HK（U/10⁴ cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=2.143×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10^-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.6cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《Effects of validamycin in controlling Fusarium head blight caused by Fusarium graminearum: Inhibition of DON biosynthesis and induction of host resistance》 作者:Jing Li，Yabing Duan，Chuanhong Bian，Xiayan Pan，Chengjie Yao，Jianxin Wang，Mingguo Zhou 期刊:Pesticide Biochemistry and Physiology 影響因子:2.87 PMID:30744889
《Galangin and Pinocembrin from Propolis Ameliorate Insulin Resistance in HepG2 Cells via Regulating Akt/mTOR Signaling》 作者:Yinkang Liu, Xiali Liang,Gensheng Zhang,Lingjie Kong,Wenjun Peng and Hongcheng Zhang 期刊:Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 影響因子:1.984 PMID:30420897

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