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水土中總磷酸鹽含量檢測試劑盒說明書
微量法
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
英文名稱：Test kit for total phosphate content in water and soil
關鍵詞：水土中總磷酸鹽含量|水土中總磷酸鹽含量檢測|水土中總磷酸鹽
貨號：BC4215
規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品簡介：
總磷酸鹽包含正lin酸鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、多ju磷酸鹽等各種磷酸鹽的形式，反應了水土中的磷酸鹽水平，是一個水質(zhì)和土壤質(zhì)量評價的重要指標。
在酸性溶液中，在分解劑和高溫條件下，將無機磷酸鹽和有機磷酸鹽水解成正lin酸鹽，正lin酸鹽可與鉬酸銨反應成磷鉬酸，在還原劑存在時被還原為磷鉬藍，在 660nm 處有特征吸收峰。

試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計/酶標儀、天平、臺式離心機、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、20 目篩、漩渦震蕩儀、EP 管、蒸餾水、濃硫酸。

產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：濃硫酸 10mL×1 瓶，自備。
試劑二：粉劑×2 瓶，4℃保存。每瓶臨用前加入 15mL 蒸餾水溶解備用。
試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 5mL 雙蒸水，溶解后 4℃保存一周。
試劑五：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 5mL 雙蒸水，溶解后 4℃保存一周。
試劑六：液體 5mL×1 瓶，室溫保存。
標準品：粉劑×1 支，4℃保存。臨用前加入 1.4mL 下述稀釋液溶解粉劑，配成 20μmol/mL 的磷標準液
稀釋液的配制：按蒸餾水體積(mL)：試劑一體積（mL）：試劑二體積（mL）=10:1:2 的比例混合即可，現(xiàn)用現(xiàn)配。
定磷試劑的配制：按 H2O：試劑四：試劑五：試劑六=2:1:1:1 的比例配制，配好的工作液應為淺黃色。若變色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，工作液應現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：配試劑*用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

操作步驟：
一、樣本處理：
1. 水樣：按照水樣體積（mL）：試劑一體積（mL）：試劑二體積（mL）為 10:1:2 的比例（建議取 1mL 水樣，加入 100μL 試劑一和 200μL 試劑二），用封口膜封口，95℃水浴 30min，冷卻后待測。
2. 土樣：（1）新鮮土樣風干，過 20 目篩；（2）按照土壤質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)：試劑一體積（V）：試劑二體積（V）=1:10:1:2（建議稱取約 0.1g 土樣，加入 1mL 蒸餾水，再加入 100μL 試劑一和 200μL 試劑二），用封口膜封口，95℃水浴振蕩 30min，10000g，25℃離心 10min，取上清液待測。
二、測定步驟：
1、 分光光度計/酶標儀預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 660nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將 10μmol/mL 標準液用稀釋液稀釋為 1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078125、0.039μmol/mL的標準溶液備用。
3、 操作表：(在 1.5ml 離心管中依次加入下列試劑)
測定管  標準管  空白管
樣品（μL）      30       -       -
標準溶液（μL）  -       30      -
試劑三（μL）    45      45      45
定磷試劑（μL）  150    150     150
蒸餾水（μL）    75      75     75
充分混勻，40℃靜置 10min，反應完成吸取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板中，
測定 660nm 處吸光值 A，分別記為 A 測定管、A 標準管和 A 空白管，△A=A 測定管-A
空白管，△A 標準=A 標準管-A 空白管，空白管只需測一次。

總磷酸鹽含量計算
1、 標準曲線的繪制：
以各個標準溶液的濃度為 x 軸，其對應的△A 標準為 y 軸，繪制標準曲線，得到標準方程 y=kx+b，
將△A 帶入方程得到 x（μmol/mL）
2、 總磷酸鹽含量的計算：
土樣總磷酸鹽含量（μmol /g 土樣）=x×V 樣÷（V 樣×W÷V 樣總）=1.3x÷W。
水樣總磷酸鹽含量（μmol /mL 水樣）= x×V 樣總÷V 水樣=1.3x。
V 樣：加入樣本體積，0.03mL；
V 樣總：樣本處理加到土樣中的液體總體積，1.3mL；
W：樣本質(zhì)量，g；
V 水樣：水樣體積，1mL。

注意事項
1、 定磷試劑應現(xiàn)配現(xiàn)用，正常顏色為淺黃色，如有變色或變藍則均為失效。
2、 加入試劑三后可能會產(chǎn)生絮狀沉淀，其對后續(xù)實驗無影響，加入定磷試劑后即自行消除。
3、 當△A 大于 1 時，建議將樣本用稀釋液稀釋后再進行測定。