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共價結合型果膠（CSP）含量檢測試劑盒說明書
微量法
注意：正式測定之前選擇2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
英文名稱：Covalently bound pectin (CSP) content detection kit
關鍵詞：共價結合型果膠|共價結合型果膠含量|CSP|CSP含量檢測
貨號：BC4135
規(guī)格：100T/48S
產品內容：
提取液一：80%乙醇，自備。即將80mL 無水乙醇和20mL 蒸餾水混合。
提取液二：液體50mL× 1 瓶，4℃保存。
提取液三：液體70mL× 1 瓶，4℃保存。
試劑一：濃硫酸30mL，自備。
試劑二：液體3mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體5mL× 1 瓶，4℃保存。
標準品：粉劑×1 支，10mg 半乳糖醛酸，4℃保存。臨用前加入0.943mL 提取液三，配成50μmol/mL的標準液
產品說明：
果膠(Pectin)是構成細胞初生壁和中膠層的主要成分，對細胞起著軟化和黏合作用。果膠間以Ca2+橋及其他離子鍵、氫鍵、糖苷鍵、酯鍵和苯環(huán)偶聯(lián)的方式交聯(lián)，通過不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠，如水溶性果膠（WSP）、離子結合型果膠（ISP）和共價結合果膠（CSP）。
利用帶有螯合劑的堿溶液提取共價結合型果膠（CSP），其在酸性條件下水解生成半乳糖醛酸，后者在硫酸溶液中與咔zuo進行縮合反應形成紫紅色的化合物，生成物質在530 nm 處有*吸收峰。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調式移液槍、研缽/勻漿器、丙tong、濃硫酸、無水乙醇和蒸餾水。
操作步驟：
一、共價結合型果膠的提?。?/span>
取約0.1g 樣本，加入1mL 提取液一，室溫快速勻漿，95℃水浴20min，冷卻至室溫，4000g 25℃離心10min，棄上清。沉淀加入1.5mL 提取液一和丙tong交替各洗2 遍（渦旋振蕩2min 左右，4000g25℃離心10min，棄上清即可），沉淀即為粗細胞壁，加入1mL 提取液二（去除淀粉）浸泡15 小時，4000g 25℃離心10min，棄上清，加入1mL 提取液三，充分勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清液待測。
二、測定步驟：
1、分光光度計/酶標儀預熱30min 以上，調節(jié)波長至530nm，蒸餾水調零。
2、將50μmol/mL 標準液用提取液三稀釋為0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL 的標準溶液備用。
3、操作表：

三、共價結合型果膠含量的計算：
1、標準曲線的繪制：
以各個標準溶液的濃度為x 軸，其對應的△A 標準為y 軸，繪制標準曲線，得到標準方程y=kx+b，將△A 測定帶入方程得到x（μmol/mL）
2、共價結合型果膠含量的計算：
共價結合型果膠含量(μmol /g 鮮重)= x×V 提取液三÷W =x÷W
V 提取液三：加入提取液三的體積，1mL；
W：樣本鮮重，g。
注意事項：
1、濃硫酸具有強腐蝕性，操作時需特別注意，90℃加熱取出后冷卻再打開蓋子，以防液體飛濺燒傷。
2、若△A 超過0.3，可將樣本提取液三進行適當稀釋再進行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。