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北京索萊寶科技有限公司
產(chǎn)品展廳
NADP-蘋果酸脫氫酶（NADP-MDH活性檢測(cè)試劑盒 紫外分光光度法
  • 品牌：Solarbio
  • 產(chǎn)地：北京
  • 貨號(hào)：BC1050
  • 發(fā)布日期： 2019-05-20
  • 更新日期： 2025-10-31
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 北京
品牌 Solarbio
貨號(hào) BC1050
保存條件 2-8℃保存
英文名稱 NADP-malate dehydrogenase (NADP-MDH activity assay kit)
CAS編號(hào)
保質(zhì)期 1年

產(chǎn)品名稱：NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名： NADP-Malate Dehydrogenase（NAD-MDH）Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC1050         產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣          產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：400
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：NADP-蘋果酸脫氫酶試劑盒|蘋果酸脫氫酶活性檢測(cè)| NADP-MDH活性檢測(cè)|試劑盒

簡(jiǎn)要介紹：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，線粒體中 MDH 是 TCA 循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。草 酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物，連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH 在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著 重要的角色，包括線粒體的能量代謝、蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不 同的輔酶特異性，MDH 分為 NAD-依賴的 MDH 和 NADP-依賴的 MDH， NADP-MDH 主要存在于 真核細(xì)胞中。 NADP-MDH 催化 NADPH 還原草酰乙酸生成蘋果酸，導(dǎo)致 340nm 處光吸收下降。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
商品貨號(hào)：商品品牌：規(guī)格基本售價(jià)：選擇規(guī)格
BC1050-50管/48樣Solarbio 50管/48樣400.00元

產(chǎn)品內(nèi)容
提取液：提取液 50 mL×1 瓶，在 4℃保存；
試劑一：液體 40 mL×1 瓶，在 4℃保存；
試劑二：粉劑×2 支，-20℃保存；臨用前加入 250μL 雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存； 試劑三：粉劑×2 支，-20℃保存；臨用前加入 300μL 雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，線粒體中 MDH 是 TCA 循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。草 酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物，連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH 在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著 重要的角色，包括線粒體的能量代謝、蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不 同的輔酶特異性，MDH 分為 NAD-依賴的 MDH 和 NADP-依賴的 MDH， NADP-MDH 主要存在于 真核細(xì)胞中。 NADP-MDH 催化 NADPH 還原草酰乙酸生成蘋果酸，導(dǎo)致 340nm 處光吸收下降。
自備儀器和試劑 紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL 石英比色皿和蒸餾水

操作步驟

  • 粗酶液提取：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，棄上清，按照每 200 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 400μL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次），8000g 4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測(cè)。 組織：稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置 冰上待測(cè)。 血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
二、測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、試劑一置于 37℃水浴中預(yù)熱 30min 以上（保證無(wú)沉淀）。
3、操作表：
 
試劑名稱（μL）測(cè)定管空白管
樣本20
蒸餾水
20
試劑一760760
試劑二1010
試劑三1010
將上述試劑按順序加入 1 mL 石英比色皿中，充分吹打混勻后立即記錄 340nm 波長(zhǎng)下初始吸 光度 A1 和反應(yīng) 1min 后的吸光度 A2，計(jì)算 ΔA 空白=A1 空白-A2 空白，ΔA 測(cè)定=A1 測(cè)定-A2 測(cè)定，計(jì)算 ΔA=ΔA 測(cè)定-ΔA 空白。

三、NADP-MDH 活力單位的計(jì)算： 
1、血清（漿）NADP-MDH 活力的計(jì)算
單位的定義：每毫升血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-MDH（U/mL）=ΔA÷ε÷d×V 反總÷V 樣÷T×109 =6430×ΔA ε：NADPH 消光系數(shù)，6.22×103 L/ mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積，0.0008L； V 樣：加入樣品體積，0.02mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min。
2、組織中 NADP-MDH 活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗 1nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-MDH（U/mg prot）=ΔA÷ε÷d×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷T×109 = 6430× ΔA ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗 1nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-MDH（U/g 鮮重）=ΔA÷ε÷d×V 反總÷（W×V 樣÷V 提?。耇×109 = 6430 × ΔA ÷W ε：NADPH 消光系數(shù)，6.22×103 L/ mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積，0.0008L； V 樣：加入樣品體積，0.02mL；V 提?。禾崛∫后w積，1mL；W：樣本鮮重，g；Cpr :樣本蛋白濃度， mg/ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1min。
3 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NADP-MDH 活力的計(jì)算:
單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘消耗 1nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單 位。
NADP-MDH（U/104 cell）=ΔA÷ε÷d×V 反總÷（200×V 樣÷V 提?。耇×109 =13 × ΔA ÷W ε：NADPH 消光系數(shù)，6.22×103 L/ mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積，0.0008L； V 樣：加入樣品體積，0.02mL；V 提?。杭?xì)胞提取液體積，0.4mL；200：200 萬(wàn)細(xì)胞；T：反應(yīng)時(shí) 間，1min。

注意事項(xiàng)
 1、粗酶液的提取必須在 0℃ - 4℃中操做完成，以防止酶變性失活。
 2、實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑一 37℃放置。
 3、建議一人加樣一人比色。盡量保持反應(yīng)溫度為 37℃。
 4、空白管測(cè) 1-2 管即可。
聯(lián)系方式
手機(jī)：17801761073微信同號(hào)
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